自 2018 年 8 月非洲豬瘟首次在中國(guó)發(fā)現(xiàn)以來(lái),一年多來(lái)非洲豬瘟給養(yǎng)豬業(yè)造成幾乎毀滅性的打擊,市民們深感菜籃子中豬肉之沉重,豬價(jià)及生豬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展多次出現(xiàn)在國(guó)家領(lǐng)導(dǎo)人的關(guān)注之下。各種鼓勵(lì)養(yǎng)豬政策不斷出臺(tái),各大研究院所專家及集團(tuán)企業(yè)發(fā)布了諸多的復(fù)養(yǎng)方案,復(fù)養(yǎng)方案中豬場(chǎng)生物安全的建設(shè)都會(huì)提高到最為重要的環(huán)節(jié),然而在針對(duì)非洲豬瘟壓力下,消毒劑的選擇還存在不少謬誤,筆者就非洲豬瘟壓力下豬場(chǎng)的消毒劑選擇作一論述。
1. 非洲豬瘟病毒的特點(diǎn)
非洲豬瘟(ASF)是由非洲豬瘟的病毒(ASFV)感染家豬和野豬引起的一種烈性傳染病。非洲豬瘟病毒在脂質(zhì)溶劑、洗滌劑、氧化劑里面很容易失活,比如次氯酸鹽和苯酚。如 ASFV 與 2.3% 的氯和3% 的鄰苯基苯酚,或者合成的碘溶液接觸 30min 就會(huì)失活。其他使ASFV 失活的有效措施包括福爾馬林、氫氧化鈉等??傊?,肥皂水、洗滌劑、堿性物質(zhì)對(duì)畜舍、器具、衣物、工具、人類居所等消毒非常有效。飛機(jī)上的消毒劑推薦使用衛(wèi)可。被病毒污染的飼料、飲水和肥料應(yīng)被掩埋或焚燒。被 ASFV 污染豬糞可用 1% 氫氧化鈉或氫氧化鈣4 ℃處理 3 min 或 0.5% 濃度處理30 min。ASFV 在 pH 4 ~ 10 的溶液中比較穩(wěn)定,但在 pH 小于 4 或大于 11.5 的條件下,并且培養(yǎng)基中不含血清會(huì)立刻失活 ;在 25% 的含有血清的培養(yǎng)基,且 pH 為 13.4的條件下可以存活數(shù)天 ;5 ℃的血清中可以存活 6 年以上。非洲豬瘟病毒對(duì)溫度敏感,在 60 ℃的條件下持續(xù) 30 min,或者 56 ℃持續(xù)70 min 都能滅活 ;在豬的糞便中保持感染性能達(dá)到數(shù)周,在腐敗的血液中可存活 15 周,在室溫保存的血清或血液中可存活 18 個(gè)月。
總之,ASFV 是有囊膜病毒,沒(méi)有有機(jī)物保護(hù)是很容易被滅活,但在有機(jī)物保護(hù)下,該病毒對(duì)環(huán)境及消毒劑抵抗力又變得很強(qiáng)大,養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境中 ASFV 總是被有機(jī)物保護(hù),消毒劑選擇必須考慮到這一點(diǎn)。
2 消毒的定義及效果影響因素
2.1 消毒與滅菌的區(qū)別
消毒與滅菌是不同數(shù)量級(jí)的清除殺滅微生物的概念。
消毒是指殺滅或去除外環(huán)境中各種病原微生物,目標(biāo)是達(dá)到無(wú)害化的過(guò)程。正常消毒的標(biāo)準(zhǔn)要求是微生物滴度降低量達(dá)到 103 量級(jí)就可以,即消毒的結(jié)果是殺滅或者清除微生物達(dá)到 99.9% 就是符合消毒要求。若用消毒對(duì)象污染的自然微生物的殺滅率來(lái)評(píng)定消毒效果,一般以殺滅或清除率達(dá)到 90% 為合格。
滅菌是指殺滅或去除外環(huán)境中一切微生物(包括且不限于病原微生物)的過(guò)程。因此目前國(guó)際上規(guī)定,滅菌過(guò)程必須使滅菌物品污染的微生物的存活概率降低到 10-6。而針對(duì)非洲豬瘟這個(gè)特定疫病的危害嚴(yán)重性,顯然常規(guī)的消毒標(biāo)準(zhǔn)是不適合的,針對(duì)非洲豬瘟病毒的殺滅要力爭(zhēng)采用滅菌級(jí)的標(biāo)準(zhǔn)。
2.2 消毒效果的幾個(gè)影響因素
2.2.1 化學(xué)消毒劑的特性
1)化學(xué)消毒劑的種類
消毒劑的選擇必須針對(duì)要處理或者消滅的微生物的特點(diǎn)來(lái)確定,例如細(xì)菌芽孢或者非囊膜病毒必須選用滅菌級(jí)消毒劑,選用低效消毒劑(單鏈季銨鹽)效果就很差。非洲豬瘟病毒為有囊膜病毒,在沒(méi)有有機(jī)物保護(hù)的裸病毒時(shí)很容易被季胺鹽類滅活,10% 癸甲溴銨稀釋3200 倍,20 ℃,作用 10 min 病毒滴度降低 3.6 Log。 2)消毒劑的配方優(yōu)異的消毒劑配方能顯著提高消毒效果。復(fù)方消毒劑的代表產(chǎn)品是衛(wèi)可(Virkon? S),其主要成分是過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物能產(chǎn)生生物殺滅劑——高活性氧 ;偏磷酸鹽能中和硬水中的金屬離子 ;烷基苯磺酸鈉起到表面活性劑作用,濕潤(rùn)消毒物體表面 ;蘋果酸能降低 pH,增效生物殺滅劑 ;氨基磺酸降低 pH,氧化因子和氯化鈉通過(guò)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生氯化因子,綜合具有“氧化、氯化、酸化”三合一功效,并佐劑成分有效去除了有機(jī)物和硬水的影響,有效性的顏色指示劑。復(fù)配后成效顯著 :殺菌譜廣,性質(zhì)穩(wěn)定,速效,可在低溫下使用,不易受有機(jī)物、酸、堿及其他物理、化學(xué)等因素的影響,對(duì)金屬器械無(wú)腐蝕,無(wú)毒無(wú)殘留,溶于水能飲用。 3)消毒劑的濃度劑量消毒劑的濃度劑量是操作過(guò)程中的基本條件之一。首要是保障消毒劑的劑量,在配比濃度時(shí)一般都是以有效成分凈含量來(lái)進(jìn)行配比,不正規(guī)生產(chǎn)企業(yè)標(biāo)簽中往往有陷阱,導(dǎo)致配比濃度往往達(dá)不到應(yīng)有比例。
2.2.2 外界因素
1)環(huán)境溫度
總所周知,大部分消毒劑隨著溫度的降低,活性下降,溫度越高消毒劑效率越好。溫度高低對(duì)消毒效果的影響,往往隨消毒方法、化學(xué)成分及微生物種類不同而不同。例如,戊二醛在低溫的使用效果就不如在高溫的使用效果,因此低溫季不建議使用戊二醛。
2)環(huán)境相對(duì)濕度
氣霧噴霧消毒和熏蒸消毒受環(huán)境相對(duì)濕度的影響十分明顯,環(huán)境中的濕度過(guò)大會(huì)降低消毒劑的濃度,直接導(dǎo)致消毒劑效果失效。例如甲醛熏蒸消毒的最佳相對(duì)濕度為80% ~ 90%。
3)消毒劑的作用時(shí)間
國(guó)標(biāo)中評(píng)價(jià)消毒劑的作用時(shí)間一般為 30 min,可是現(xiàn)場(chǎng)操作中往往達(dá)不到 30 min,直接導(dǎo)致消毒劑對(duì)微生物的殺滅效果下降,例如部分消毒池人經(jīng)過(guò)時(shí)不到 1 min,這種即時(shí)接觸是達(dá)不到效果的,而對(duì)這方面的研究國(guó)內(nèi)還較少。
4)消毒時(shí)環(huán)境的酸堿度
酸堿度的變化對(duì)消毒的效果影響很大 :一方面部分消毒劑只有在特定的酸或堿環(huán)境中才有效 ;另一方面酸堿環(huán)境中微生物的存活強(qiáng)度也不同。例如 ASFV 在 pH 4 ~ 10的溶液中比較穩(wěn)定,但在 pH 小于 4或大于 11.5、不含血清的培養(yǎng)基中ASFV 會(huì)立刻失活。
5)表面活性和稀釋用水的水質(zhì)
在使用表面活性劑消毒時(shí)應(yīng)格外小心,例如陰離子表面活性劑會(huì)影響單鏈季銨鹽類的消毒作用 ;例如部分地區(qū)的硬水(水中含鈣、鎂離子高)等也容易消耗消毒劑的消毒成分。
6)有機(jī)物質(zhì)類的干擾
養(yǎng)豬場(chǎng)的環(huán)境中會(huì)殘留大量的有機(jī)物,例如蛋白質(zhì)、尿液、血液、油脂等物質(zhì),這類物質(zhì)不但是微生物的保護(hù)傘,還會(huì)消耗化學(xué)消毒劑,容易使消毒劑與有機(jī)物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致消毒效果的下降。例如普通的氯制劑、季銨鹽及過(guò)氧化物類的消毒劑受有機(jī)物干擾比較明顯,醛制劑受有機(jī)物的影響相對(duì)較小。因此,在消毒前,建議先做消毒對(duì)象表面的清理和清潔工作,清除消毒對(duì)象的表面有機(jī)物和生物膜。同時(shí)要注意選擇消毒劑有效性測(cè)試時(shí)的模擬現(xiàn)場(chǎng)的有機(jī)物的環(huán)境。
7)滲透性
消毒環(huán)境的表面往往是凹凸不平的,而且還存在大量的縫隙,作為消毒劑必須要能夠滲透到所有消毒物品的表面,達(dá)到消毒的全方位。不同消毒劑的滲透性不同,例如用作熏蒸時(shí)甲醛蒸汽比環(huán)氧乙烷穿透力差。優(yōu)秀的消毒劑必須具備很強(qiáng)的滲透有機(jī)物表面的能力。
8)消毒設(shè)備在實(shí)際的畜牧生產(chǎn)過(guò)程中,消毒都是借助消毒設(shè)備來(lái)實(shí)現(xiàn)。消毒設(shè)備對(duì)消毒效果的影響主要是,噴霧霧滴的大小,霧滴的懸浮時(shí)間,一般來(lái)說(shuō),霧滴越小,懸浮時(shí)間越長(zhǎng),和有害微生物的接觸時(shí)間越久,消毒效果就越好。
9)微生物種類特性和數(shù)量級(jí)
因?yàn)椴煌⑸锏淖陨硖匦詫?duì)不同類型的消毒劑的抗性也不同,因此消毒劑選擇還要考慮環(huán)境中的主要微生物的種類和數(shù)量級(jí),污染嚴(yán)重和高數(shù)量級(jí)的環(huán)境必須選擇高效的消毒劑。
3 非洲豬瘟壓力下豬場(chǎng)消毒劑選擇要點(diǎn)
3.1 殺滅非洲豬瘟病毒的消毒劑概述
世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(Office International Des Epizooties OIE) 建議對(duì) AFSV 可使用 0.8% 氫氧化鈉、2.3% 次氯酸鹽、0.3% 福爾馬林、3% 鄰苯基苯酚和碘混合物進(jìn)行消毒,但均需作用 30 min 可滅活病毒。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部推薦的防控非洲豬瘟的消毒劑見(jiàn)表 1。
3.2 非洲豬瘟壓力下選擇消毒劑的要點(diǎn)
3.2.1 注重消毒“藥”的概念
不同的消毒“ 藥 ” 對(duì) ASHV殺滅比例也存在著極大差異,非瘟壓力下選擇消毒“藥”也需要根據(jù) ASFV 的特點(diǎn)選擇有效的產(chǎn)品。 除了有效外還要考慮殺滅的程度,據(jù)中國(guó)獸醫(yī)協(xié)會(huì)編寫的《 非洲豬瘟知識(shí)手冊(cè) 》, 國(guó)外有實(shí)驗(yàn)室用高毒力或中等毒力的 ASFV 感染豬只后,血液中最高病毒滴度可達(dá) 109HAD50/mL,口腔液、尿液和糞便中最高滴度可達(dá) 105HAD50/mL。另有研究表明,水是非常快速的感染途徑,在水里面含量只要有一個(gè) TCID50 就會(huì)引起感染。因此對(duì)防控 ASFV 飲水消毒不能是有效,而是要滅菌級(jí)。
3.2.2 注重“用藥量”的概念
上面所提到消毒劑需要合理的配比比例,確保有效的問(wèn)題 ;對(duì)于現(xiàn)場(chǎng)用量來(lái)說(shuō),還需要考慮豬舍的空間和面積,例如空舍消毒按地面面積 ×2.5 作為整棟舍的面積,墻 面、天花板、地面的消毒藥的用量 為 300 ml/m2, 噴霧消毒 40~80 ml/m2(注意消毒霧滴大?。?。
3.2.3 綜合各方面因素,準(zhǔn)確用“藥”
從表 2 可以看出針對(duì)非洲豬瘟病毒,消毒劑的種類不同、使用劑量、作用時(shí)間、環(huán)境溫度及有機(jī)物污染等,造成病毒滴度降低量差異顯著,生產(chǎn)上可根據(jù)消毒的對(duì)象和目的,選擇合適的比例。如人穿雨鞋在腳踏盆消毒,考慮有機(jī)物干攏,如停留時(shí)間短于 1 min,可以選擇1∶100 衛(wèi)可 ;如停留 10 min,則可按 1∶800 稀釋。另 ASFV 在有機(jī)物存在下抗力增強(qiáng),所以在消毒前清洗就更為重要。
3.2.4 高效消毒劑定義有別于養(yǎng)豬生產(chǎn)中高效的消毒劑
化學(xué)消毒劑可分為高效、中效和低效消毒劑。高效消毒劑能殺滅包括細(xì)菌芽孢和真菌孢子在內(nèi)的外界環(huán)境中的各種微生物的消毒劑,又稱滅菌劑。例如,在化學(xué)消毒劑的劃分上,醛類是高效消毒劑,因?yàn)?/span> 2% 戊二醛 30 min 可以殺滅破傷風(fēng)的芽孢 ;針對(duì)非洲豬瘟病毒,某醛制劑產(chǎn)品(12.74% 戊二醛 +4.84% 癸甲氯銨)在 20 ℃、1%有機(jī)物中加磷酸緩沖液(pbs)作用 30 min,稀釋比例為 1∶50,非洲豬瘟病毒滴度降低量為 4.6 log。如生產(chǎn)中使用國(guó)內(nèi)常見(jiàn)的一種 2% 的稀戊二醛則濃度理論上至少應(yīng)該為1∶8 稀釋,而且非復(fù)方的顯然影響滅活效果。因此高效消毒劑只是代表其主要成分,在生產(chǎn)實(shí)踐中還因考慮多種因素。
3.2.5 要了解產(chǎn)品主要成分和特性,避免盲目使用
生產(chǎn)中要了解產(chǎn)品性能,除了對(duì) ASFV 有效,同時(shí)要根據(jù)表 3 避免用刺激性強(qiáng)的消毒劑進(jìn)行帶豬消毒,若使用不當(dāng)會(huì)刺激豬的眼睛、呼吸道黏膜,豬的呼吸道黏膜受損會(huì)讓 ASFV 更容易入侵豬體。
3.3 豬場(chǎng)消毒工作前要進(jìn)行清理和清潔工作
由于豬舍存在如灰塵、糞便、尿液及血液等大量有機(jī)物,這些有機(jī)物大大提高了非洲豬瘟病毒對(duì)環(huán)境的抗性,消毒前使用專用的泡沫清洗劑有利于提高消毒效果。
4 非洲豬瘟消毒效果評(píng)價(jià)
中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸醫(yī)研究所編制《非洲豬瘟防控清潔消毒技術(shù)要點(diǎn)》,列出非洲豬瘟消毒效果評(píng)價(jià)方案。
1)設(shè)置消毒指示微生物評(píng)價(jià)消毒效果
消毒前,將枯草桿菌芽孢涂于棉布或紗布,作為消毒指示微生物,置于待消毒場(chǎng)所。消毒結(jié)束后,檢測(cè)芽孢殺滅率。殺滅率達(dá)到 99.9%以上,判定消毒合格。
枯草桿菌芽孢抗性是強(qiáng)于朊病毒(瘋牛病病原)以外的所有微生物,非洲豬瘟病毒是有囊膜病毒,對(duì)消毒劑抗力較弱,故可以枯草桿菌芽孢作為消毒指示微生物評(píng)價(jià)滅殺非洲豬瘟病毒的效果。
2)檢測(cè)非洲豬瘟病毒評(píng)價(jià)消毒效果
消毒后,在養(yǎng)殖場(chǎng)、交易市場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、無(wú)害化處理場(chǎng)點(diǎn)、疫區(qū)臨時(shí)檢查站點(diǎn)等高風(fēng)險(xiǎn)場(chǎng)所,采集樣品,并進(jìn)行非洲豬瘟病毒的檢測(cè)。針對(duì)病毒消毒效果的評(píng)價(jià)方法主要包括分子生物學(xué)評(píng)價(jià)法和細(xì)胞培養(yǎng)評(píng)價(jià)法,養(yǎng)殖場(chǎng)只能采用分子生物學(xué)評(píng)價(jià)法,但由于被滅活病毒的核酸有可能檢測(cè)出陽(yáng)性,存在假陽(yáng)性現(xiàn)象。
3) 采用哨兵豬來(lái)評(píng)價(jià)消毒成效
恢復(fù)生產(chǎn)前,可以選擇 10 ~20 頭非洲豬瘟陰性健康的豬,作為“哨兵”,進(jìn)場(chǎng)自由活動(dòng) 30d,并每天觀察臨床癥狀,采集樣品進(jìn)行檢測(cè),確保豬場(chǎng)消毒徹底衛(wèi)生。
2008 年 FAO / OIE /世界銀行發(fā)布了針對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的生物安全(Biosecurity) 的定義是 :為降低病原體傳入和散布風(fēng)險(xiǎn)而實(shí)施的措施。生物安全的中心思想是隔離、消毒和防疫。應(yīng)用到非洲豬瘟防控的方案就是隔離和消毒,消毒需要根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境和消毒劑等綜合因素進(jìn)行考慮,選擇好消毒劑,規(guī)范使用 ,才能建立起針對(duì)非洲豬瘟的生物安全網(wǎng)。
(參考文獻(xiàn):略)